摘要：
培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料,。由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型，對營養(yǎng)物質的要求也各不相同,，加之實驗和研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多,，使用的原料也各有差異,，但從營養(yǎng)角度分析，培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源,、氮源,、無機鹽、生長素以及水分等。另外,，培養(yǎng)基還應具有適宜的pH值,、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓,。滅菌常用的方法有化學試劑滅菌,、射線滅菌、干熱滅菌,、濕熱滅菌和過濾除菌等,。可根據不同的需求,，采用不同的方法,，如培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌，空氣則采用過濾除菌,。 關鍵詞：滅菌 方法 技術
在醫(yī)學中微生物的殺滅叫滅菌,；滅菌的結果是無菌，也就是說指定樣品經過一系列處理后不含任何微生物,。例如手術器械的消毒過程等。微生物的滅菌如果用加熱方法與溫度有關外還和作用時間有關,。100度溫度下加熱30分左右時候基本上大部分微生物會被殺滅,，但是細菌的芽孢卻例外，能耐高溫,。
在醫(yī)學實踐中,，常采用物理、化學及生物的方法,，清除環(huán)境中的微生物,，以切斷傳播途徑，保護易感人群,，從而控制或消滅傳染病?，F將有關術語介紹如下：
消毒 (disinfection) 殺滅物體上病原微生物的方法，稱為消毒,。用于消毒的化學藥品稱消毒劑,。常用濃度下的消毒劑，只對細菌繁殖體有效,，對其芽胞則需提高消毒劑濃度和延長作用時間才能殺滅,。
滅菌 (sterilization) 殺滅物體上所有微生物，包括細菌芽胞的方法,，稱滅菌,。
無菌 (asepsis) 物體中無活的微生物存在，稱為無菌。防止微生物進入機體或物體的方法,，稱為無菌操作或無菌技術,。進行微生物學實驗、外科手術,、換藥,、注射時，均需嚴格遵守無菌操作規(guī)定,。
防腐 (antisepsis) 防止或抑制微生物在物體中生長繁殖的方法,，稱防腐。用于防腐的化學藥品稱防腐劑,。使用同一種化學藥品低濃度時為防腐劑,，高濃度則為消毒劑。
衛(wèi)生清理 (sanitation) 將微生物污染了的無生命物體表面還原為安全水平的處理過程,。例如醫(yī)院內的病房,、病人使用過的用具、布類的衛(wèi)生處理等,。 一,、物理消毒滅菌法
物理消毒滅菌法是醫(yī)學實踐中常用的方法，通常包括熱力,、紫外線,、輻射、超聲波和濾過除菌等,。 (一)熱力滅菌法
熱滅菌法 利用高溫使微生物細胞內的一切蛋白質變性,，酶活性消失，致使細胞死亡,。通常有干熱,、濕熱和間歇加熱滅菌等法。
熱力能破壞微生物的蛋白質和核酸,，使蛋白質變性凝固,，核酸解鏈崩裂，從而導致其死亡,。
1.干熱滅菌法 直接利用火焰將微生物燒死（如燒接種環(huán),、載玻片和試管口等）。不能用火焰滅菌的物品則利用熱空氣滅菌,將物品放在烘箱中加熱到160～170℃,持續(xù)90分鐘,，此法適用于玻璃,、金屬和木質的器皿。
(1)焚燒與燒灼 焚燒僅用于廢棄的被病原微生物污染的物品,、垃圾,、人及動物尸體等,。燒灼用于微生物實驗室的接種環(huán)、金屬器械,、試管口,、瓶口等的滅菌。
(2)干烤 使用干烤箱滅菌,，一般需加熱**160℃～170℃經2h,，可達到滅菌的目的。適用于玻璃器皿,、瓷器,、金屬物品等的滅菌。 2.濕熱消毒滅菌法
濕熱滅菌 以沸水,、蒸氣和蒸氣加壓滅菌,。巴氏滅菌法就是濕熱滅菌，此法有兩種方式,，①低溫長時間處理：在61.7～62.8℃下處理30分鐘,；②高溫短時間處理：在71.6℃或略高溫度下處理15分鐘。在上述諸法中,，以蒸氣加壓滅菌效果**好,，可用常壓蒸氣滅菌，也可在高壓蒸氣鍋中（一般使用1千克/厘米2）滅菌,其蒸氣溫度可達121℃,能將耐熱的芽孢在30分鐘內全部殺死,。但對某些易被高壓破壞的物質,，如某些糖或有機含氮化合物，宜在0.6千克/厘米2壓力下(110℃)滅菌15～30分鐘,。
(1)巴氏消毒法 法G學者巴斯德創(chuàng)用而得名。主要以較低溫度殺滅病原菌或特定微生物,，而使物品中不耐熱成分不被破壞,。此法有兩種：一種方法是加熱61.1℃～62.8℃、30min,；另一種方法是加熱71.7℃,、15～30s。現在人們多用后種方法對牛奶進行消毒,。 (2)煮沸法 煮沸100℃,、5～10min，可殺死細菌繁殖體,。芽胞則需要煮沸1～2h,。常用于注射器、食具與飲水的消毒,。
(3)流通蒸氣法 用阿諾(Arnold)蒸鍋或普通蒸籠,，加熱100℃,、15～30min，可殺滅細菌的繁殖體,。若將消毒后的物品放入37℃孵箱培養(yǎng),，使芽胞發(fā)育成繁殖體，次日再蒸一次,，如此連續(xù)三次以上,，可達到滅菌效果，這種方法稱為間歇滅菌法,。常用于不耐高溫的物品,，如糖類、血清和雞蛋培養(yǎng)基等的滅菌,。
(4)高壓蒸氣滅菌法 是一種迅速而有效的滅菌方法,。使用高壓蒸氣
滅菌器，利用加熱產生蒸氣,，隨著蒸氣壓力不斷增加,，溫度隨之升高，通常壓力在103.4kPa(相當舊制的15磅/吋 2 或1.05kg/cm 2 )時,，器內溫度可達121.3℃,，維持15～30min，可殺滅包括芽胞在內的所有微生物,。此法常用于一般培養(yǎng)基,、生理鹽水、手術器械及敷料等耐濕和耐高溫物品的滅菌,。
(二)紫外線與電離輻射 #p#分頁標題#e#
1.日光與紫外線 日光消毒是**簡單,、經濟的方法，將病人的被褥,、衣服,、書報等在日光下曝曬數小時，可殺死表面的大部分微生物,。日光中殺菌的成份主要是紫外線,。紫外線200～300nm時，具有殺菌作用,，其中以265～266nm波長的紫外線殺菌力**強,。紫外線的殺菌原理，主要是細菌DNA吸收紫外線后,，一條鏈上相鄰的兩個嘧啶通過共價鍵結合形成二聚體,，從而干擾了DNA的正常堿基配對，導致細菌死亡或變異,。紫紅外線能透過石英,，但不能穿過一般玻璃或薄紙,，因此，紫外線只適用于物體表面及空氣的消毒,。例如手術室,、嬰兒室、傳染病房,、無菌制劑室,、微生物接種室的空氣消毒。
2.電離輻射 X射線,、γ射線和陰極射線等電離輻射,，有較高的能量與穿透力，因而可產生較強的致死效應,。其機制在于產生游離基,，破壞DNA。此法常用于大量一次性醫(yī)用塑料制品的消毒,；亦可用于中藥成藥和食品的消毒,，而不破壞其化學成分和營養(yǎng)成分。 (三)超聲波
超聲波是不被人耳感受的高于 20千周/s的聲波,。其殺菌機制主要是它通過水時發(fā)生空化作用,，而破壞了細菌細胞質的膠體狀體，使其胞膜,、胞質分離,，胞壁及胞膜破碎致細菌繁殖體死亡。此法主要用于粉碎細胞,，以提取細胞組分或制備抗原等,。 (四)微波
是一種波長為 1mm到1m左右的電磁波，稱微波,。它能穿透玻璃,、塑料薄膜與陶瓷等物質，但不能穿透金屬表面,。目前用于消毒的微波有2,450MHz與915MHz兩種，常用于檢驗室用品,、非金屬器械,、無菌病室的食品用具及其它用品的消毒。
(五)濾過除菌
濾過除菌是用濾菌器阻留過濾液體和氣體的細菌,，以達到無菌的目的,。濾菌器含有微細小孔，只允許液體或氣體通過,，而大于孔徑的細菌等顆粒不能通過,。常用濾菌器有蔡氏濾器,、玻璃濾器、薄膜濾器及高效顆?？諝鉃V器四種,。主要用于不耐熱的血清、抗毒素,、生物藥品以及空氣等的除菌二,、化學消毒法
許多化學藥物都有抑制或殺滅微生物作用，按作用不同分為化學消毒劑和化學治療劑兩類,，用于消毒,、防腐和治療疾病。 (一)常用消毒劑的種類和應用
具有殺死微生物的化學藥物稱消毒劑,。消毒劑對人體有毒性作用,，只能外用，不能內服,。主要用于皮膚粘膜的傷口,、器械、排泄物和周圍環(huán)境的消毒,。消毒劑在低濃度時也可作防腐用,，但防腐劑的關鍵是應要對人體無毒性作用。消毒劑種類濃度與用途見表 13-1,。 常用消毒劑的種類濃度與用途
(二)常用消毒劑的殺菌機制
消毒劑殺菌原理一般有以下三方面：
1.使菌體蛋白質變性或凝固 例如醇類,、醛類、酸堿類以及高濃度的重金屬鹽和酚類,。 2.干擾細菌的酶代謝系統 例如低濃度重金屬鹽,、氧化劑與細菌胞漿中某些酶的-SH基結合，使酶活性喪失,。
3.損傷細菌細胞膜 例如表面活性劑,、脂溶劑、低濃度酚類等,。 (三)影響消毒滅菌效果的因素
消毒滅菌效果受微生物種類,、消毒劑及環(huán)境等多種因素影響。
1.消毒劑的性質,、濃度與作用時間 同一種消毒劑的濃度愈高,，作用時間愈長，殺菌效果愈好,。但乙醇以70%左右的消毒效果**好,。其原因是更高濃度的乙醇使菌體表面蛋白迅速脫水凝固，影響乙醇滲入菌體內,。
2.細菌種類 同一消毒劑對不同細菌的殺菌效果不一樣,，是因為不同細菌對消毒劑抵抗力不同,。細菌的幼齡菌對消毒劑比較敏感。
3.有機物及其他因素 細菌?；旌显谘?、膿、痰,、排泄物中,，這些物質中的有機物可阻礙消毒劑與細菌的接觸，并消耗藥品,，因而減弱消毒效果,。
消毒劑在消毒滅菌過程中的溫度、濕度,、酸堿度,、穿透力、表面張力等因素,，都對消毒滅菌的效果有一定影響,。
三、生物因素對細菌的影響
在自然界中,，細菌與細菌之間,，細菌與動植物之間存在著共生和拮抗的關系。我們可以利用生物之間的拮抗作用,，使用某些細菌的代謝產物,、植物成分等抑制或殺滅病原性細菌，以防治傳染病,。
(一)抗生素(antibiotie)
抗生素是由放線菌,、真菌或細菌等微生物在代謝過程中產生，并能抑制或殺滅其他微生物的有機化合物,。
抗生素的種類很多,，有些已能人工合成，其抗菌機制主要有以下幾種： 1.抑制細胞壁的合成,，如青霉素,、頭孢霉素、桿菌肽等,。
2.增加細胞膜的通透性,，抑制細胞膜的運輸功能，如制霉菌素,、多粘菌素等。 3.抑制細菌蛋白質的合成,，如氯霉素,、四環(huán)素,、慶大霉素、卡那霉素等,。 4.抑制細菌核酸的合成,，如新生霉素、爭光霉素等,。 #p#分頁標題#e#
抗生素在臨床上廣泛的應用,，在治療傳染病上起到了積極作用，但病原菌的耐藥菌株日益增多,。從患者標本中分離細菌作藥物敏感試驗,，以選用對致病菌敏感的抗生素治療，是減少耐藥菌株和提高抗生素療效的有效措施之一,。 (二)噬菌體(bacteriophage)
噬菌體是寄生于細菌的病毒,，具有一定的形態(tài)結構和嚴格的寄生性，需在活的易感細胞內增殖,，并常將細菌裂解,。 (三)中草藥
臨床實踐和實驗研究都證明有很多中草藥有抑菌、殺菌作用,，如黃連,、黃柏、黃芩,、連翹,、金銀花等，其不僅對多種細菌有抗菌作用,，而且對某些抗生素耐藥菌株也有抗菌效果,。
用理化方法殺死一定物質中的微生物的微生物學基本技術。滅菌的徹底程度受滅菌時間與滅菌劑強度的制約,。微生物對滅菌劑的抵抗力取決于原始存在的群體密度,、菌種或環(huán)境賦予菌種的抵抗力。滅菌是獲得純培養(yǎng)的必要條件,，也是食品工業(yè)和醫(yī)藥*域中必需的技術,。
